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溶菌酶LYSOZYME具有抗菌、消炎、抗病毒等作用，已广泛应用于食品、医药、轻工业及生物工程等生产领域。目前溶菌酶的生产方式主要是从鸡蛋清中提取，分离成本高，限制了溶菌酶在畜禽等低附加值产业的应用。因此，寻找一种新的溶菌酶生产方式迫在眉睫。本课题采用山东大学构建的一支甲醇诱导型重组毕赤酵母菌株NCY2发酵表达鸡蛋清溶菌酶HEWL。分别在摇瓶水平和10L机械搅拌式生物反应器水平研究了NCY2菌株的最适生长和表达条件，确定了HEWL在10L反应器水平的异源表达工艺。主要研究内容及结果如下（1）在摇瓶水平上，确定了适合NCY2生长的BSM培养基四种主要组分的浓度NH42SO450G/L、甘油30G/L、CASO4093G/L、PTM1微量元素4ML/L；在此基础上优化了NCY2的最适生长条件PH值50，温度30℃，接种量8％；最后在BMGY/BMMY培养基中，初步确定了NCY2的最适表达条件甲醇浓度2，诱导时间96H，诱导温度20℃，诱导PH35。（2）在10L生物反应器水平上，以摇瓶实验结果为基础，通过甘油流加的方式，实现了菌株NCY2的高密度培养，发酵液中的菌体干重可达到4184G/L，比原结果高出了13，菌体生长时间缩短了3H。（3）在10L生物反应器水平上，按照上述高密度培养工艺，菌株NCY2完成生长后，研究了甲醇流加对HEWL表达的影响，确定了该体系甲醇的流加方式诱导开始时以每小时30ML/L的速率连续流加甲醇2～4H后，增大流速至每小时56ML/L直至发酵结束，最终发酵液中HEWL活性可达632U/ML。（4）确定了NCY2在10L生物反应器水平表达HEWL的工艺条件诱导过程中，调节温度20℃，PH50，每24H流加200MLNH42SO420W/V，连续发酵123H后，HEWL活性可达到1335U/ML，与优化前相比，提高了211倍。
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